CellTiter-glo 실험! - Cell Viabilty Assay

안녕하세요

 

Cell Viabilty를 측정하는 여러 실험들 중 Cell titer glo에 대해 설명드리려고 해요.

 

기존 Cell Viabilty assay로 유명한것은 MTT Assay이지만 MTT assay는 여러 가지 한계점이 있습니다.

 

대표적으로 실험이 단순하지않아서 좀 번거롭습니다. 그리고 감도가 매우 낮고 MTT 시약에 의한 독성이 확인되었습니다.

 

MTT assay를 대체하고자 CellTiter-Glo assay를 가져왔습니다. 

 

 CellTiter Glo Assay 를 CTG assay라고 부르겠습니다.

 

CTG assay는 세포 배양중에 세포에 존재하는 ATP를 측정해서 cell viabilty를 측정하는 제품입니다.

 

시약에 독성도 없고 실험자가 처리한 물질에 의한 변화 무를 제공해주어서 결과를 측정합니다.

 

그리고 아주 senstive해서 작은 개수의 세포도 측정이 가능합니다.

 

발광도 아주 안정적으로 유지되서 Screening실험에서도 많이 활요되고있습니다.

 

 

Promega 이미지

위에 이미지는 promega 제품 꺼에서 따왔습니다. 위 그림과 같은 원리로 측정된다고 생각하시면 됩니다.

 

아 그리고 발광을 측정할 수 있는 lumincent 기기라고 해야 하나? 그 기기와 전용 96 well이 필요해서 실험 디자인하실때 꼭 기기와 전용 96well이 무엇인지 확인하시고 잇는지 확인해야 해요. 아마 투명하지 않은 96 well로 알고 있습니다.

 

꼭 확인하셔야 해요!!!

 

이후 실험 방법 간단하게 설명드릴게요

 

실험방법!!

 

Cell titer glo assay

1. cell키우고 있는 dish에 1:1 비율로 treat한다.

2. 2분 이상 cell lysis 되도록 shake 해준다. 10분정도 상온에 보관한다.

 

3. 차광된 96 well plate에 100ul 씩 옮겨서 luminescent signal을 측정한다.

 

실험순서는 이렇게 됩니다.

주의사항으로 앞에 설명드렸듯이 엄청 민간함 assay입니다.

pipetting이나 처리할 때 꼭 주의하셔야 해요. 

조그만 달라져도 값이 엄청 튀어요. 이를 보정하기 위해서 좀 더 희석하거나 결과가 적당한 값이 나오도록 찾으셔야 해요.

너무 높다 싶으면 좀 희석을 하셔두되고!

 

이상 말 줄이겠습니다.